Deze studie beschrijft de karakterisering van farmacokinetische (PK) eigenschappen van acetaminophen (APAP) in het Two-Organ-Chip platform (2-OC), een tweekamer toestel dat in staat is om 3D weefsels te kweken onder stroming. De APAP darmabsorptie en het levermetabolisme werden nagebootst door respectievelijk menselijke darm- en leverequivalenten. De darmbarrière werd geproduceerd met behulp van Caco-2 en HT-29 cellen. De lever sferoïden werden geproduceerd met HepaRG en HHSTeC cellen. Levensvatbaarheid en toxiciteit van de cellen werden beoordeeld door MTT-test, histologie, confocale immunohistochemie en multiparametrische hoge-inhoudsanalyse. Genexpressie van darm en lever equivalenten werden beoordeeld door real-time PCR. Drie samenstellingen van Microfysiologisch Systeem (MPS) werden toegepast: Intestine 2-OC, Lever 2-OC, en Intestine/Liver 2-OC. De orale toediening werd nagebootst door APAP over de apicale zijde van de darmbarrière te plaatsen en de intraveneuze routes werden nagebootst door de toepassing in het medium. De monsters werden geanalyseerd met HPLC/UV. APAP 12 uM of 2 uM behandeling niet induceren cytotoxiciteit voor de intestinale barrière (24 h time-point) of voor de lever sferoïden 12 h time-point), respectievelijk. Alle preparaten vertoonden een langzamere absorptie van APAP dan bij de mens werd gerapporteerd: Piektijd (Tmax) = 12 uur voor Intestine 2-OC en 6 uur voor Intestine/Liver 2-OC in zowel statische als dynamische omstandigheden, tegenover een gerapporteerde Tmax van 0,33 tot 1,4 uur na orale toediening bij de mens. Het metabolisme van APAP verliep ook trager dan bij mensen werd gerapporteerd. De APAP-halfwaardetijd (T1/2) bedroeg 12 uur in de dynamische lever 2-OC, terwijl T1/2 = 2 ± 0,4 uur werd gemeld voor mensen. Monsters genomen uit het statische Liver 2-OC-preparaat vertoonden geen afname van de APAP-concentratie. Deze bevindingen tonen het MPS vermogen en potentieel om de menselijke PK eigenschappen emuleren en wijzen op de kritische rol van mechanische stimulus over celfunctionaliteit, vooral door het aantonen van de duidelijke positieve invloed van de microfluïdische stroom over de lever equivalenten metabole performance.