Denna studie beskriver karakteriseringen av de farmakokinetiska egenskaperna hos acetaminofen (APAP) i Two-Organ-Chip-plattformen (2-OC), en tvåkammaranordning som kan kultivera 3D-vävnader under flöde. APAP:s tarmabsorption och levermetabolism efterliknades av mänskliga tarm- respektive leverekvivalenter. Tarmbarriären framställdes med hjälp av Caco-2- och HT-29-celler. Leverns sfäroider producerades med HepaRG- och HHSTeC-celler. Cellens livskraft och toxicitet bedömdes med hjälp av MTT-analys, histologi, konfokal immunohistokemi och multiparametrisk höginnehållsanalys. Genuttryck av tarm- och leverekvivalenter bedömdes genom realtids-PCR. Tre sammansättningar av det mikrofysiologiska systemet (MPS) tillämpades: Tarmen 2-OC, levern 2-OC och tarmen/levern 2-OC. Den orala administreringen efterliknades genom APAP-placering över den apikala sidan av tarmbarriären och de intravenösa vägarna efterliknades genom applicering i mediet. Proverna analyserades med HPLC/UV. APAP 12 μM eller 2 μM behandling inducerade ingen cytotoxicitet för tarmbarriären (24 timmars tidpunkt) eller för leversfäroiderna (12 timmars tidpunkt), respektive. Alla preparat visade långsammare absorption av APAP än vad som rapporterats för människor: Peak time (Tmax) = 12 timmar för Intestine 2-OC och 6 timmar för Intestine/Liver 2-OC under både statiska och dynamiska förhållanden, jämfört med rapporterade Tmax på 0,33 till 1,4 timmar efter oral administrering till människor. APAP-metabolismen var också långsammare än vad som rapporterats för människor. Halveringstiden för APAP (T1/2) var 12 timmar i den dynamiska 2-OC-behandlingen i lever, jämfört med T1/2 = 2 ± 0,4 timmar som rapporterats för människor. Prover tagna från det statiska preparatet Liver 2-OC visade ingen minskning av APAP-koncentrationen. Dessa resultat visar MPS förmåga och potential att efterlikna mänskliga PK-egenskaper och belyser den kritiska roll som mekanisk stimulans spelar för cellfunktionalitet, särskilt genom att visa den tydliga positiva påverkan av det mikrofluidiska flödet på leverns motsvarande metaboliska prestanda.