Julianna Margulies è nata l’8 giugno 1966 a Spring Valley (vicino a New York City), come la più giovane delle tre figlie di Francesca (Goldberg), insegnante e ballerina dell’American Ballet, e Paul Margulies, scrittore pubblicitario e filosofo. È di origine ebraica ashkenazita (Romania, Austria, Ungheria e Russia). Prima di iniziare la scuola superiore nel New Hampshire all’età di 14 anni, ha vissuto diversi anni con la sua famiglia a Parigi e in Inghilterra. Ha ottenuto una laurea in arti liberali al Sarah Lawrence College, dove è apparsa in diverse opere teatrali nel campus. Ha lavorato come cameriera fino al suo primo ruolo come prostituta che cerca di rigare dritto in Out for Justice (1991). C’è voluto più di un anno per trovare un altro ruolo; durante questo periodo, è riuscita a mantenersi grazie a diverse produzioni teatrali regionali e spot televisivi nazionali. Fino a quando non è diventata un personaggio fisso in ER (1994), ha recitato come guest star in diverse serie televisive e in un pilot. Da allora, ha recitato in diversi film, tra cui Ghost Ship (2002), Evelyn (2002), e Snakes on a Plane (2006), ed è protagonista del dramma della CBS The Good Wife (2009), per il quale ha vinto sia un Emmy che un Golden Globe.