Julianna Margulies 1966. június 8-án született Spring Valleyben (New York közelében), Francesca (Goldberg), az Amerikai Balett tanára és táncosa, valamint Paul Margulies, reklámszakíró és filozófus három lánya közül a legfiatalabbként. Askenázi zsidó származású (Romániából, Ausztriából, Magyarországról és Oroszországból). Mielőtt 14 évesen megkezdte a középiskolát New Hampshire-ben, több évet élt családjával Párizsban és Angliában. B.A. diplomát szerzett szabad művészetekből a Sarah Lawrence College-ban, ahol több színdarabban is szerepelt az egyetemen. Pincérnőként dolgozott, mígnem első szerepét az Out for Justice (1991) című filmben játszott prostituáltként kapta, aki egyenesbe akar jönni. Több mint egy évbe telt, mire újabb szerepet talált; ez idő alatt több regionális színházi produkcióból és országos tévéreklámokból tudta fenntartani magát. Amíg az ER (1994) állandó szereplője nem lett, több tévésorozatban és egy pilotban is vendégszerepelt. Azóta több filmben is szerepelt, köztük a Ghost Ship (2002), az Evelyn (2002) és a Snakes on a Plane (2006) című filmekben, valamint főszerepet játszott a CBS The Good Wife (2009) című drámájában, amelyért Emmy- és Golden Globe-díjat is kapott.