Münchenin LMU:n märehtijöiden klinikkaan otettiin yhteyttä joulukuussa 2010 lypsykarjan kasvattajalta, jolla oli karjaongelma, joka johtui BB-rotuisten risteytysvasikoiden hiustenlähdöstä. Omistajan mukaan molempien sukupuolten vasikat, jotka olivat peräisin lypsykarjarotuisista emoista ja jotka oli siitetty eri BB-sonneilla keinosiemennyksen avulla, olivat kärsineet 5 vuoden aikana. Hän kertoi, että nämä vasikat syntyivät normaalilla karvapeitteellä. Ne alkoivat 2-3 viikon iässä, ja niillä ilmeni huonoa säästäväisyyttä, liiallista hilseilyä kaulan ja pään alueella, ja alueet muuttuivat hiuspeitteisiksi pian sen jälkeen, kun ne olivat alkaneet päästä ja edenneet selän keskiviivalle, kaulalle ja olkapään alueelle. Kaikilla vasikoilla 8-10 viikon iässä karva alkoi kasvaa takaisin kyseisillä alueilla. Karjan eläinlääkäri alkoi tutkia ongelmaa omistajan taloudellisten ja hyvinvointiin liittyvien huolenaiheiden vuoksi. Fyysisten tutkimusten ja näytteiden ottamisen jälkeen eläinlääkäri ei pystynyt määrittämään mitään ilmeistä syytä yhdellekään vasikalle. Kihelmöintiä ei esiintynyt, ektoparasiitteja ei löytynyt eikä ihon kaavinnoista saatu poikkeavia tuloksia. Lähettävän eläinlääkärin ottamat ihobiopsiat eivät olleet yksiselitteisiä hiustenlähtöisyyden syyn määrittämisessä. Tautia sairastavien eläinten hoitaminen hyönteismyrkyillä ja injektoitavilla vitamiinivalmisteilla ei parantanut tilannetta. Yllättävää oli myös se, että saman tilan puhdasrotuiset lypsävasikat eivät tiettävästi olleet koskaan sairastuneet tähän tautiin. Karjan eläinlääkärin kanssa käytyjen neuvottelujen jälkeen kolme eläintä, joilla oli tyypillisiä oireita, lähetettiin klinikalle tarkempaa diagnostiikkaa varten, ja karjakäynti järjestettiin.
Omistajan näkemyksen mukaan kolmella lähetetyllä urosvasikalla, jotka olivat iältään 19-, 28- ja 42-päiväisiä, oli saman sairauden eri vaiheita. Ne saapuivat klinikalle kolmen kuukauden aikana (tammi-maaliskuu 2011). Seuraavat vasikoiden hoitotoimenpiteet olivat samat kaikille vasikoille: Syntymän jälkeen vasikat erotettiin emostaan, ja ne sijoitettiin yhden laatikon karsinoihin, joissa oli olkipeti. Ensimmäisten 7-10 elinpäivän aikana vasikat saivat 2 litraa täysmaitoa emältään kahdesti päivässä. Tämän jälkeen vasikoille annettiin kaksi kertaa päivässä 4 litraa kaupallista maidonkorviketta. Heinää, suolaa, kivennäisrehua, viljaa tai vettä ei tarjottu tähän asti. Kuten kaikki muutkin sairastuneet vasikat, nämä kolme vasikkaa saivat oireiden ilmaantumisen jälkeen suun kautta annettavan vitamiiniseoksen sekä loislääkettä (Moxidectin Triclamox Rind Pour-on-Lösung ad us. vet.; moxidectin 0. Vet.5 mg/kg BM, triklabendatsoli 20 mg/kg BM), mutta karvanlähtö eteni siitä huolimatta.
Kliininen tutkimus vastaanotettaessa, verinäytteenottomenettely ja analyysi
Heti klinikalle saavuttuaan tehtiin kliininen tutkimus Dirksenin ym. mukaan. Kustakin eläimestä otettiin verta kaulalaskimoon pistämällä ja se laitettiin suoraan S-Monovette- (Sarstedt, Nümbrecht-Rommelsfeld, Saksa), antikoagulantti- (K3 EDTA, 1,6 mg/ml; Sarstedt) ja verikaasu-Monovette-putkiin (50 IU/ml kalsiumtasapainotettua litiumhepariinia; Sarstedt). Verinäytteet käsiteltiin välittömästi, ja seerumi kerättiin sentrifugoimalla 3000 rpm 10 minuutin ajan 25 °C:ssa. Serologiset parametrit sekä glutationiperoksidaasin aktiivisuus kokoverestä määritettiin automaattisella analyysijärjestelmällä (Automatic Analyser Hitachi 911; Roche Diagnostics, Indianapolis, IN). Hematologiset analyysit tehtiin automaattisella hematologisella analysaattorilla (Sysmex F820; Sysmex, Norderstedt, Saksa). Lisäksi seerumin molybdeenipitoisuus määritettiin IDEXX VetMed Labor GmbH:ssa, Ludwigsburg, Saksa. Kahdelta vasikalta (vasikka 2 ja 3) määritettiin sairaalahoitopäivänä saadun seerumin C-vitamiinipitoisuus nestekromatografisella massaspektrometrillä (MVZ Labor Dr. Limbach, Heidelberg, Saksa).
Lisäksi kolmesta eri kohdasta (yhdestä ei-vaurioituneesta ja kahdesta vaurioituneesta kohdasta) otettiin paikallispuudutuksessa kahdeksan millimetrin kokoiset ihobiopsiat, jotka kiinnitettiin välittömästi 10-prosenttiseen neutraalipuskurilla puskuroituun formaldehydiin, ja ne lähetettiin Münchenin LMU:n eläinlääketieteelliselle patologian tutkimuslaitokselle tutkimuksia varten. Formaliiniin kiinnitetyt näytteet leikattiin rutiininomaisesti parafiiniin ja käsiteltiin histologista tutkimusta varten, ja ne värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla (HE) ja Giemsa:lla.
Kliiniset oireet ja kliininen patologia
Taulukossa 1 esitetään kolmen vasikan perusominaisuudet ja kliinisten tutkimusten tulokset sairaalahoitoon tullessa. Poikkeaviin kliinisiin löydöksiin kuuluivat seuraavat: epänormaali asento, jossa takajalat oli koottu vatsan alle (vasikat 1 ja 2), kun taas vasikka 3 ei kantanut painoa vasemmalla takaraajalla. Vasikoilla 1 ja 2 oli kylmät raajat. Vasikoilla 1 ja 3 todettiin lievää punoitusta inkisiivien ympärillä ja limakalvojen lievästi lisääntynyttä vaaleanpunaista väriä. Sydämen uloskultoinnissa havaittiin epäsäännöllinen sydämen rytmihäiriö, mutta sivuääntä tai kaulalaskimon pullistumaa ei kuulunut (vasikat 1 ja 2). Kahdella vasikalla todettiin hypotermiaa (vasikka 1, 35,9 °C; vasikka 2, 37,6 °C), kun taas vasikan 3 ruumiinlämpö oli koholla (40,2 °C). Suuontelon ja jalkojen väleissä ei havaittu haavaumia. Kosteustila oli normaali ihoteltan ja silmämunien asennon arvioinnin perusteella. Kahdella vasikalla (vasikat 1 ja 2) oli hiustenlähtöä pitkin selkää, kaulan molemmin puolin, otsalla, molempien korvien tyven ympärillä, molemmilla poskilla ja silmien ympärillä. Näillä alueilla punoittavaa ihoa peitti osittain paksu kuori, joka oli helposti poistettavissa. Kyseisten alueiden iho oli kuiva ja vain lievästi tulehtunut; eroosioita ei havaittu (kuva 1). Sitä vastoin vasikalla 3 oli vain lievää hilseilyä pään ja kaulan eri puolilla.
Kaksi karjan edustajaa, jotka kärsivät hiustenlähtötaudista. a-e: Vasikka 1; f-j: Vasikka 2. Hiustenlähtöä esiintyy otsassa, silmien ympärillä, poskissa, selässä ja kaulan molemmin puolin sekä molemmissa kyynärpäissä. Molempien korvien tyvi on vaurioitunut. Liiallinen hilseily, jossa on paksuja, helposti irtoavia kuoria, selvimmin kaulan molemmin puolin
Haematologiset ja kliiniskemialliset löydökset on esitetty taulukossa 2. Poikkeavia löydöksiä olivat polysytemia (vasikat 1, 2 ja 3), leukosytoosi (vasikat 1 ja 3), hyperproteinaemia (vasikat 1, 2 ja 3), hypalbuminaemia (vasikat 1, 2 ja 3), hypokalsemia (vasikat 1 ja 3) sekä marginaalinen hypokalemia (vasikat 1, 2 ja 3). Kuparipitoisuus ja glutationiperoksidaasiaktiivisuus olivat vastaavien viitearvojen sisällä. Sen sijaan rauta- (vasikat 1 ja 3) ja sinkkipitoisuudet (vasikka 3) olivat alle vastaavien viitearvojen. C-vitamiinipitoisuus oli molemmilla tutkituilla vasikoilla normaalialueella (vasikka 2, 9,2 mg/l; vasikka 3, 7,6 mg/l; vertailuväli Labor Limbach, Heidelberg, 2-20 mg/l).
Histologiset löydökset
Vaurioituneesta ihosta otetuissa näytteissä oli epidermiksen lamellaarista ortokeratoottista hyperkeratoosia, johon liittyi keratiinihiutaleita ja muutama pintapuolinen kuori. Dermiksessä karvatupet olivat pieniä, ja follikulaarilumiinit sisälsivät vain muutamia hiusakseleita. Lisäksi todettiin minimaalinen perivaskulaarinen pinnallinen lymfosyyttinen infiltraatio/tulehdus. Merkityksellisestä bakteeri- tai sieni-infektiosta, loistartunnasta tai autoimmuunisairaudesta ei ollut viitteitä (kuva 2).
Vasikka 1:n ihon histologia esittelypäivänä: Pinnallinen laminaarinen ortokeratoottinen hyperkeratoosi, joka vastaa kliinistä kuvaa (hiutaleet). Karvatupet ovat diffuusisti pienentyneet (tähdet). Huomautus: Nautaeläinten ihon normaali apokriininen rauhasten laajentuma (#)
Hoito ja kliininen taudinkulku
Kahdelle vasikalle (vasikat 1 ja 2) ei annettu hoitoa koko sairaalahoidon ajan. Niille tarjottiin 3 litraa kaupallista maidonkorviketta kahdesti päivässä, ja ne saivat heinää ja vasikoiden startteria (viljaa) vapaasti valittavaksi. Molemmat vasikat joivat hyvin ja alkoivat syödä hyvällä ruokahalulla seuraavien päivien aikana. Molemmilla vasikoilla havaittiin karvojen uutta kasvua ja hilseilyn vähenemistä 7 viikon iässä (1 ja 3 viikkoa klinikalle saapumisen jälkeen). Alun perin ohut karva oli kasvanut kokonaan takaisin, kun vasikka kotiutettiin 14 (vasikka 2) ja 18 (vasikka 1) viikon iässä. Tuolloin uudelleen kasvanut tumma karvapeite oli helposti erotettavissa hieman vaaleammasta alkuperäisestä, ehjästä karvapeitteestä. Tarkastuskäynnillä 9 kuukautta kotiuttamisen jälkeen karvapeite oli normaali, eikä karvanlähtöä ollut havaittu.
Vasikalla 3 diagnosoitiin septinen niveltulehdus vasemmassa jalkapohjanivelessä. Alkuhoito koostui kefkinomista (1 mg/kg BM; s. c.; Cobactan 2,5 % ad us. vet.; MSD Animal Health Innovation GmbH, Schwabenheim, Saksa) ja meloksikaamista (0,5 mg/kg BM; s. c.; Metacam 20 mg/ml ad us. vet.; Boehringer Ingelheim GmbH, Ingelheim, Saksa). Viisi päivää sisäänoton jälkeen tehtiin arthrotomia. Tilapäisen paranemisen jälkeen ontuminen ja eläimen yleistila heikkenivät, ja eläin lopetettiin 12 päivää kirurgisen toimenpiteen jälkeen. Tähän mennessä oli havaittu ainoastaan hilseilyä pään ja kaulan alueella. Kuvassa 3 esitetään kolmen vasikan ihon ja karvapeitteen muutosten kliininen kulku.
Klinikalle lähetettyjen kolmen belgiansinisen risteytysvasikan ihon ja karvapeitteen muutosten kliininen kulku eri vartaloalueilla kolmen kuukauden aikana. Ensimmäinen rivi kuvaa ihon muutoksia (esim. hilseilyä); toinen rivi kuvaa karvanlähtöä ja uusien karvojen kasvua tai niiden puuttumista
Karjatutkimus
Karjakäynti järjestettiin lypsykarjan kasvattajan ja laumaeläinlääkärin kuulemisen jälkeen. Tila sijaitsi Etelä-Saksassa kahden muun tilan läheisyydessä mäen päällä (~ 800 m merenpinnan yläpuolella). Vierailun aikaan karjassa oli 27 lehmää (20 BS, 3 RH, 3 HF, 1 BS x HF), viisi hiehoa (BS) ja seitsemän vasikkaa. Karjan liukuva keskiarvo edellisenä vuonna oli 6551 kg/lehmä/vuosi. Kaikki täysikasvuiset eläimet olivat samassa navetassa, jossa oli patjat ja olkipeti.
Ruokinta ja hoito
Laktoivien eläinten ruokinta koostui nurmisäilörehusta, heinästä ja kahdesta erilaisesta väkirehusta arvioidun senhetkisen maitotuotoksen mukaan (yksi tai useampi kauha täynnä). Ruohosäilörehun, heinän ja maissipelletin kemialliset analyysit suoritettiin fysiologian, fysiologisen kemian ja eläinten ravitsemuksen laitoksella (LMU München). Tulokset kuiva-ainekiloa kohti on lueteltu lisätiedostossa 2, ja ote lypsävän lehmän annoksen tietokoneavusteisesta laskennasta on esitetty lisätiedostossa 3. Koska omistajalla ei ollut käytössään vaakaa, annos voitiin vain arvioida, ja sen määräksi määritettiin 20 kg nurmisäilörehua ja 3 kg heinää (märkäpainot). Laktaatiohuipussa olevalle lehmälle omistaja arvioi syötetyn väkirehun määräksi noin 5 kg (3 kg viljaseosta, 2 kg pellettejä). Koska kivennäisseoksen ruokintaa pidettiin parhaimmillaankin satunnaisena, sitä ei otettu huomioon laskelmassa. Arvioitu annos sisälsi 22 % raakakuitua (14 % rakenteeltaan) ja 10 % raakavalkuaista. Kuitujen ylitarjonta (ruohosäilörehu, jonka kuiva-ainepitoisuus on erittäin korkea) ja valkuaisen puute (negatiivinen typpitasapaino pötsissä) tulivat ilmi. Malliarvioiden mukaan laktaatiohuipussa oleva lehmä sai riittävästi rehua tuottaakseen 23,2 kg maitoa.
Kuivia lehmiä ja hiehoja ruokittiin vain nurmisäilörehulla ja heinällä. Kivennäisrehua annettiin satunnaisesti (4-7 päivän välein) lypsäville eläimille ja joskus myös kuiville eläimille. Kaikki lehmät pääsivät kesäkuukausina laitumelle. Kaikki lähialueen tilat saivat vettä samasta kaivosta. Tilalla tuotettiin heinää ja nurmisäilörehua. Lanta levitettiin kaikille laitumille; muita lannoitteita ei ollut käytetty viimeisten 10 vuoden aikana. Suolaa ei tarjottu osana annosta.
Vasikat syntyivät sidontakarsinassa. Poistamisen jälkeen ne sijoitettiin joko yksittäisiin tai yhteisiin laatikkokarsinoihin. Kukin vasikka sai ternimaitoa ja maitoa omalta emältään ensimmäisten 7-10 elinpäivän ajan, minkä jälkeen ne siirrettiin kaupalliseen maidonkorvikkeeseen. Viimeisten kuukausien aikana ennen tutkimusta maidonkorvike vaihdettiin toiseen merkkiin, mutta ongelma jatkui edelleen. Maidonkorvikkeen sekoittamisesta, määrästä, sekoittamisesta ja ruokintalämpötilasta ei ollut saatavilla vakiomuotoista toimintaohjetta. Pyydettäessä omistaja totesi, että hän arvioi maidonkorvikkeen määrän ja että sekoituslämpötila vaihteli kylmän ja käsilämpöisen välillä riippuen lämpimän veden saatavuudesta navetassa. Omistaja totesi, että karvanlähtöä oli esiintynyt vasikoilla, joille oli syötetty ainoastaan täysmaitoa, mutta käytettävissä ei ollut tietoja, joiden perusteella olisi voitu tarkastella kyseisten vasikoiden ruokinnan hallintaa. Joidenkin kuukausien ajan BB-risteytysvasikat olivat saaneet myös kolme 10 ml:n annosta suun kautta annettavaa vitamiiniseosta kolmen ensimmäisen elinpäivän aikana. Kuuden viikon iässä vasikoille tarjottiin vapaavalintaista heinää, viljaa ja vettä. Vasikat vieroitettiin noin 3 kuukauden iässä.
Vieroitettuja vasikoita edeltävä tutkimus
Seitsemän vasikkaa tutkittiin karjakäynnin yhteydessä. Neljä nuorempaa vasikkaa (kolme BS, yksi BB x BS), jotka olivat 1-10 päivän ikäisiä, sekä kolme vanhempaa vasikkaa (BB x HF, BB x RH, BB x BS), jotka olivat 6-9 viikon ikäisiä. Kaikki risteytysvasikat olivat urospuolisia; kolme naaraspuolista puhdasrotuista BS-vasikkaa oli tarkoitettu korvaaviksi hiehoiksi. Nuoremmilla vasikoilla ei ollut fyysisessä tutkimuksessa poikkeavuuksia lukuun ottamatta yhtä vasikkaa, jolla oli vastasyntyneen ripuli ja kuume; ihossa ja turkissa ei ollut havaittavissa poikkeavuuksia. Kolmella vanhemmalla vasikalla oli karvanlähtöä pään, kaulan, kyynärpäiden, olkapäiden ja selän alueella (kuva 4). Kaikilla kolmella vasikalla hiustenlähtö ja hilseily olivat alkaneet noin 3 viikon iässä, ja hiukset alkoivat kasvaa takaisin noin 6 viikon iässä. Kaikki vanhemmat vasikat olivat heikosti kehittyneitä ja niiden ruumiinkunto oli huono verrattuna samanikäisiin BB-vasikoihin. Muita löydöksiä olivat muun muassa epäsäännöllinen rytmihäiriö sydämen auskultoinnissa yhdeksän viikon ikäisellä risteytysvasikalla. Ihon testauksessa ja silmämunien asennossa ei havaittu kliinisesti havaittavia merkkejä nestehukasta. Kaikista vasikoista otettiin verinäytteet edellä kuvatulla tavalla. Kaikilla neljällä BB-risteytysvasikalla oli kohonneet hematokriittiarvot (51-59 %; keskiarvo 54 %; vertailuväli Clinic for Ruminants, LMU München, 30-36 %) ja erytrosyyttien määrä (12,5-14,6 × 1012/l; keskiarvo 13,50 × 1012/l; vertailuväli Clinic for Ruminants, LMU München, 5-8 × 1012/l). Albumiini- ja kokonaisproteiinipitoisuudet eivät viitanneet näiden vasikoiden kuivumiseen. Hematologiset ja biokemialliset parametrit sekä hivenainepitoisuudet ja glutationiperoksidaasiaktiivisuus olivat merkitsemättömiä lukuun ottamatta pienentynyttä kokonaisproteiinipitoisuutta kahden päivän ikäisellä vasikalla (42.40 g/L; vertailuväli Clinic for Ruminants, LMU München, 55-70 g/L), mikä viittasi passiivisen immuniteetin siirron epäonnistumiseen.
Neljä belgian sinistä risteytysvasikkaa tilalla, jotka oli sijoitettu laatikkokarsinoihin. Kuvat otettu karjakäynnin aikana. a ja b: BB x HF -risteytysvasikka, 6 viikkoa vanha, laajamittainen karvanlähtö kaulan, säkäpään ja silmien ympärillä. b: laajamittaista ihon hilseilyä kaulan kohdalla. c ja d: Yhdeksän viikon ikäinen BB x BS -risteytysvasikka, jolla on ollut laajamittaista hiustenlähtöä ja hienojakoista karvankasvua, huomaa asento, jossa takajalat on koottu vatsan alle. d. Kylmäkarvainen vasikka: Päässä ja korvien tyvessä lievää hilseilyä ja hienojakoista karvankasvua. e ja f: Yhdeksän viikon ikäinen BB x HF -risteytysvasikka, jolla on ollut hiustenlähtöä ja hienojakoista karvankasvua. f: Kintereissä ja olkapään alueella hienojakoista karvankasvua. g: Vastasyntynyt BB x BS -risteytysvasikka, jolla on ehjä karvapeite
Aikuisten eläinten tarkastelu
Lähes kaikilla aikuisilla eläimillä ruumenien täyttöaste vaihteli hyvin tai erittäin hyvin. Neljällätoista eläimellä 27:stä aikuisesta eläimestä havaittiin kynsien epämuodostumia, jotka johtuivat liikakasvusta ja puutteellisesta kynsien trimmauksesta, ja neljällä eläimellä näistä 14:stä oli merkkejä ontumisesta tai raajojen dekubitaalihaavoista. Kaikkien täysikasvuisten eläinten ruumiinkunto määritettiin Edmonsonin ym. mukaan. Neljän imetyksen eri vaiheissa olevan eläimen BCS oli ≤2,5/5.
Kuudesta äskettäin tuoreesta lehmästä otetut verinäytteet analysoitiin, ja hematologiset ja verikemialliset tulokset eivät osoittaneet poikkeavuuksia. Beetahydroksibutyraattipitoisuudet olivat näillä eläimillä välillä 0,5-0,9 mmol/l. Kuusi virtsanäytettä imettävistä eläimistä tutkittiin, ja tulokset olivat merkitsemättömiä lukuun ottamatta neljää näytettä, joissa natriumpitoisuudet olivat alhaiset (13,0-16,0 mmol/l; viiteraja Märehtijöiden klinikka, LMU München, > 20 mmol/l).
Lisäselvitykset
Omistajan ja laumaeläinlääkärin kanssa käytyjen neuvottelujen jälkeen tuotiin vielä neljä muuta BB-ristiverisonnasta peräisin olevaa vasikkaa, joiden ikä oli yhdestä kahdeksaan vuorokautta ja jotka oli tuotu poliklinikalle, jotta voitiin tutkia taudin kliinistä kulkua taudin alusta alkaen. Kaikki vasikat olivat saaneet ternimaitoa emoiltaan ja täysmaitoa ennen niiden noutoa. Tilan tilanteen toistamiseksi kaikki neljä vasikkaa saivat samaa kaupallista maidonkorviketta kahdesti päivässä. Vettä, heinää ja vasikoiden startteria (viljaa) tarjottiin vapaasti. Ne eivät saaneet muita käsittelyjä. Kaikki vasikat tutkittiin kliinisesti niiden saapuessa, ja niistä otettiin verinäytteet, jotka analysoitiin edellä kuvatulla tavalla, mukaan lukien seerumin C-vitamiinipitoisuuden määrittäminen. Karvoituksen esiintyminen tai puuttuminen dokumentoitiin päivittäin. Taulukossa 1 esitetään perusominaisuudet ja kliinisen tutkimuksen tulokset. Poikkeavat löydökset rajoittuivat epäsäännölliseen sydämen rytmihäiriöön kolmella vasikalla (vasikat 4, 5 ja 6). Taulukossa 2 esitetään hematologian ja kliinisen kemian tulokset, mukaan lukien seerumin C-vitamiinipitoisuus. Yhdellekään neljästä vasikasta ei kehittynyt tyypillisiä vaurioita, kuten hilseilyä ja karvanlähtöä, kun ne olivat sairaalahoidossa klinikalla seuraavien kolmen kuukauden aikana.