Julianna Margulies se narodila 8. června 1966 ve Spring Valley (nedaleko New Yorku) jako nejmladší ze tří dcer Francescy (Goldberg), učitelky a tanečnice v Americkém baletu, a Paula Marguliese, reklamního textaře a filozofa. Je aškenázského židovského původu (z Rumunska, Rakouska, Maďarska a Ruska). Než ve čtrnácti letech nastoupila na střední školu v New Hampshire, žila několik let s rodinou v Paříži a v Anglii. Získala bakalářský titul v oboru svobodných umění na Sarah Lawrence College, kde účinkovala v několika divadelních hrách na univerzitní půdě. Pracovala jako servírka až do své první role prostitutky, která se chce dostat na rovinu, ve filmu Out for Justice (1991). Trvalo více než rok, než našla další roli; během té doby se dokázala uživit z několika regionálních divadelních představení a celostátních televizních reklam. Než se stala stálicí v seriálu Pohotovost (1994), hostovala v několika televizních seriálech a pilotním díle. Od té doby si zahrála v několika filmech, například v Lodi duchů (2002), Evelyn (2002) a Hadech v letadle (2006), a v hlavní roli seriálu stanice CBS Dobrá manželka (2009), za který získala cenu Emmy i Zlatý glóbus.