The Clinic for Ruminants, LMU Munich foi contatada por um produtor de leite com um problema de queda de pêlos em bezerros cruzados BB em dezembro de 2010. De acordo com o proprietário, os bezerros de ambos os sexos de vacas leiteiras, criados por diferentes touros BB através de inseminação artificial, foram afetados ao longo de 5 anos. Ele relatou que estes bezerros nasceram com uma pelagem normal. Começando com a idade de 2 a 3 semanas, eles mostraram falta de cuidado, descamação excessiva da área do pescoço e cabeça, com áreas se tornando alopecicas logo após começar na cabeça e progredindo para a linha média dorsal, área do pescoço e ombro. Com a idade de 8 a 10 semanas, o pêlo começou a crescer de novo nas áreas afetadas em todos os bezerros. O veterinário do rebanho começou a investigar o problema devido às preocupações financeiras e de bem-estar do proprietário. Após exames físicos e amostras da pele afetada, nenhuma causa aparente pôde ser determinada pelo veterinário referente em qualquer um dos bezerros afetados. Pruritus estava ausente, não foram encontrados ectoparasitas e os raspados de pele não produziram resultados anormais. Biópsias de pele obtidas pelo veterinário que encaminhou o animal foram inconclusivas na determinação da causa da alopecia. Os tratamentos dos animais afectados com insecticidas pour-on e preparados vitamínicos injectáveis não melhoraram a condição. Também foi surpreendente que bezerros leiteiros de raça pura na mesma fazenda nunca tenham sido afetados por esta doença. Após consulta com o veterinário do rebanho, três animais com sinais típicos foram encaminhados para a clínica para mais exames diagnósticos e uma visita ao rebanho foi organizada.
De acordo com a opinião do proprietário, os três bezerros machos referidos, com 19, 28 e 42 dias de idade, se apresentaram em vários estágios da mesma condição. Eles chegaram à clínica durante um período de 3 meses (janeiro-março de 2011). O manejo seguinte para o cuidado dos bezerros foi idêntico para todos os bezerros: Após o nascimento, eles foram separados da sua respectiva mãe e alojados em baias de caixa única com cama de palha. Durante os primeiros 7 a 10 dias de vida, eles receberam 2 litros de leite integral de sua respectiva mãe duas vezes ao dia. Em seguida, os bezerros eram alimentados duas vezes por dia com 4 litros de um substituto de leite comercial. Feno, sal, ração mineral, grãos ou água não eram oferecidos até este ponto. Como todos os outros bezerros afetados, os três bezerros receberam uma mistura de vitaminas orais após o início dos sinais, assim como um tratamento pour-on com um agente antiparasitário (Moxidectin Triclamox Rind Pour-on-Lösung ad us. vet.; moxidectin 0.5 mg/kg BM, triclabendazol 20 mg/kg BM) mas a queda de cabelo progrediu independentemente.
Exame clínico na admissão, procedimento de coleta de sangue e análise
Imediatamente após a chegada à clínica, foi realizado um exame clínico de acordo com Dirksen et al. O sangue foi retirado de cada animal por punção da veia jugular e colocado diretamente em tubos S-Monovette (Sarstedt, Nümbrecht-Rommelsfeld, Alemanha), anticoagulante (K3 EDTA, 1,6 mg/ml; Sarstedt) e gasometria Monovette (50 UI/ml de heparina de lítio balanceada com cálcio; Sarstedt). As amostras de sangue foram processadas imediatamente e o soro foi colhido por centrifugação a 3000 rpm durante 10 min a 25 °C. Os parâmetros serológicos, assim como a atividade de glutationa peroxidase no sangue total, foram determinados usando um sistema de análise automática (Automatic Analyser Hitachi 911; Roche Diagnostics, Indianapolis, IN). As análises hematológicas foram realizadas com um analisador hematológico automático (Sysmex F820; Sysmex, Norderstedt, Alemanha). Além disso, a concentração de molibdénio no soro foi determinada na IDEXX VetMed Labor GmbH, Ludwigsburg, Alemanha. Em dois bezerros (bezerros 2 e 3), o nível de vitamina C no soro obtido no dia da hospitalização foi determinado por cromatografia líquida espectrometria de massa (MVZ Labor Dr. Limbach, Heidelberg, Alemanha).
Outra, uma biópsia de 8 mm de pele de três locais diferentes (um não afetado, dois locais afetados) foram tomados sob anestesia local, fixados imediatamente em formaldeído com 10% de tampão neutro e enviados para o Instituto de Patologia Veterinária, LMU Munique para exame. As amostras fixadas em formaldeído foram rotineiramente fixadas em parafina e processadas para exame histológico e coradas com hematoxilina e eosina (HE) e Giemsa.
Sinais clínicos e patologia clínica
Tabela 1 mostra as características básicas e os resultados do exame clínico dos três bezerros no momento da hospitalização. Os achados clínicos anormais incluíram o seguinte: postura anormal com as pernas traseiras recolhidas sob o abdômen (bezerros 1 e 2), enquanto que o bezerro 3 não suportava peso no membro traseiro esquerdo. Os bezerros 1 e 2 apresentavam extremidades frias. Um leve avermelhamento da gengiva ao redor dos incisivos e um leve aumento da cor rosa das membranas mucosas foram documentados nos bezerros 1 e 3. A auscultação do coração revelou uma arritmia cardíaca irregular com ausência de sopro ou distensão da veia jugular (bezerros 1 e 2). Hipotermia foi detectada em dois bezerros (bezerro 1, 35.9 °C; bezerro 2, 37.6 °C), enquanto que o bezerro 3 tinha uma temperatura corporal elevada (40.2 °C). Não foram encontradas ulcerações na inspeção da cavidade oral e espaços interdigitais. O estado de hidratação foi normal conforme determinado pela avaliação da tenda cutânea e a posição dos globos oculares. Em dois bezerros (bezerros 1 e 2), a alopecia estava presente ao longo das costas, em ambos os lados do pescoço, na testa, ao redor da base de ambas as orelhas, ambas as bochechas e ao redor dos olhos. A pele avermelhada nestas áreas era parcialmente coberta por crostas espessas que podiam ser facilmente removidas. A pele das áreas afectadas estava seca e apenas ligeiramente inflamada; não foram encontradas erosões (Fig. 1). Em contraste, o bezerro 3 mostrou apenas leve descamação em diferentes aspectos da cabeça e pescoço.
Dois representantes do rebanho que sofriam de alopecia. a-e: Bezerro 1; f-j: Bezerro 2. Queda de cabelo presente na testa, ao redor dos olhos, nas bochechas, ao longo das costas e dos dois lados do pescoço, assim como em ambos os cotovelos. A base de ambas as orelhas é afectada. Escamação excessiva com crostas espessas e facilmente removíveis, mais proeminentes em ambos os lados do pescoço
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Apesos hematológicos e químicos clínicos são demonstrados na Tabela 2. Achados anormais incluem policitemia (bezerros 1, 2 e 3), leucocitose (bezerros 1 e 3), hiperproteinemia (bezerros 1, 2 e 3), hipalbuminaemia (bezerros 1, 2 e 3), hipocalcemia (bezerros 1 e 3), assim como hipocalemia marginal (bezerros 1, 2 e 3). A concentração de cobre e a atividade de peroxidase de glutationa estavam dentro dos respectivos intervalos de referência. Em contraste, as concentrações de ferro (bezerros 1 e 3) e zinco (bezerro 3) estavam abaixo dos respectivos intervalos de referência. A concentração de vitamina C estava dentro da faixa normal em ambos os bezerros testados (bezerro 2, 9.2 mg/L; bezerro 3, 7.6 mg/L; intervalo de referência Labor Limbach, Heidelberg, 2-20 mg/L).
Apesos histológicos
Em amostras de pele afetada, houve hiperqueratose ortoqueratósica lamelar da epiderme com flocos de queratina e poucas crostas superficiais. Na derme, os folículos pilosos eram pequenos e a lumina folicular continha apenas poucas hastes de cabelo. Além disso, foi documentada uma infiltração/inflamação linfocítica superficial perivascular mínima. Não houve evidência de infecção bacteriana ou fúngica relevante, infestação parasitária ou desordem auto-imune (Fig. 2).
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Histologia da pele do bezerro 1 no dia da apresentação: Hiperqueratose laminar ortoqueratósica superficial correspondente ao quadro clínico (flocos). Os folículos pilosos são difusamente reduzidos em tamanho (asteriscos). Nota: Dilatação apócrina normal (#) da pele bovina
Tratamento e evolução clínica
Dois bezerros (bezerros 1 e 2) não receberam tratamento durante todo o período de internação. Eles receberam 3 litros de um substituto do leite comercial duas vezes ao dia e receberam feno e ração iniciadora (grão) de livre escolha. Ambos os bezerros beberam bem e começaram a comer com bom apetite durante os dias seguintes. Novo crescimento de pêlos e redução de escamação foram notados a partir da idade de 7 semanas em ambos os bezerros (1 e 3 semanas após a chegada na clínica, respectivamente). Os pêlos inicialmente finos tinham crescido completamente na época da alta aos 14 (bezerro 2) e 18 (bezerro 1) semanas. Neste momento, o pêlo escuro rebrotado podia ser facilmente diferenciado do pêlo original ligeiramente mais claro e intacto. Uma visita de controle 9 meses após a alta mostrou uma pelagem normal e não foram observados episódios de queda de pêlos.
Calf 3 foi diagnosticada uma artrite séptica da articulação tarsal esquerda. O tratamento inicial consistiu de cefquinoma (1 mg/kg BM; s.c.; Cobactan 2,5% ad us. vet.; MSD Animal Health Innovation GmbH, Schwabenheim, Alemanha) e meloxicam (0,5 mg/kg BM; s.c.; Metacam 20 mg/ml ad us. vet.; Boehringer Ingelheim GmbH, Ingelheim, Alemanha). Cinco dias após a admissão, foi realizada uma artrotomia. Após uma melhora temporária, a manqueira e o estado geral do animal deterioraram-se e o animal foi eutanizado 12 dias após a intervenção cirúrgica. Até este momento, só tinha sido observada escamação na área da cabeça e pescoço. A Figura 3 mostra a evolução clínica das alterações de pele e pelagem dos três bezerros.
Curso clínico das alterações de pele e pelagem em diferentes regiões do corpo de três bezerros cruzados de raça Azul Belga, encaminhados para a clínica durante um período de 3 meses. A primeira linha indica alterações da pele (ou seja, descamação); a segunda linha mostra presença ou ausência de queda de pêlos e crescimento de novos pêlos
Investigação do rebanho
Após consulta com o produtor de leite e o veterinário do rebanho, foi organizada uma visita ao rebanho. A fazenda estava localizada no sul da Alemanha, nas proximidades de duas outras fazendas no topo de uma colina (~ 800 m acima do nível do mar). No momento da visita, o rebanho consistia de 27 vacas (20 BS, 3 RH, 3 HF, 1 BS x HF), cinco novilhas (BS) e sete bezerros. A média do rebanho rolante no ano anterior foi de 6551 kg/ vaca/ano. Todos os animais adultos foram alojados no mesmo galpão com colchões e cama de palha.
Alimentação e manejo
A ração para os animais lactantes consistiu de ensilagem de capim, feno e duas rações concentradas diferentes de acordo com a produção atual estimada de leite (uma ou várias colheres cheias). A análise química da silagem de capim, feno e granulado de milho foi realizada no Instituto de Fisiologia, Química Fisiológica e Nutrição Animal (LMU Munique). Os resultados por kg de matéria seca estão listados no arquivo adicional 2 e um trecho do cálculo assistido por computador da ração da vaca lactante é exibido no arquivo adicional 3. Como o proprietário não tinha acesso a uma balança, a ração só pôde ser estimada e foi determinada como sendo de 20 kg de erva ensilada e 3 kg de feno (pesos húmidos). Para uma vaca no pico da lactação, o proprietário avaliou a quantidade de concentrado alimentado em cerca de 5 kg (3 kg de mistura de grãos, 2 kg de pellets). Como a alimentação da mistura mineral era considerada esporádica, na melhor das hipóteses, não foi incluída no cálculo. A ração estimada continha 22% de fibra bruta (14% estruturada) e 10% de proteína bruta. Tornou-se evidente um fornecimento excessivo de fibra (ensilagem de erva com um teor muito elevado de matéria seca) e uma falta de proteína (balanço negativo de azoto ruminal). Segundo estimativas do modelo, uma vaca no pico da lactação recebeu ração suficiente para produzir 23,2 kg de leite.
As vacas e novilhas secas receberam apenas silagem de capim e feno. A ração mineral foi dada esporadicamente (a cada 4-7 dias) aos animais em lactação e às vezes também aos animais secos. Todas as vacas tiveram acesso ao pasto durante os meses de verão. Todas as fazendas nas proximidades recebiam água do mesmo poço. Feno e erva ensilada eram produzidos na fazenda. O esterco era espalhado em todos os pastos; nenhum outro fertilizante tinha sido usado durante os últimos 10 anos. O sal não foi oferecido como parte da ração.
Calvas nasceram na área de tie-stall. Após a retirada da barragem, elas foram alojadas em baias individuais ou em baias compartilhadas. Cada bezerro recebeu colostro e leite de sua respectiva mãe durante os primeiros 7 a 10 dias de vida, quando foram trocados por um substituto do leite comercial. Durante os últimos meses antes da investigação, o substituto do leite foi trocado para uma marca diferente, mas o problema persistiu. Nenhum procedimento operacional padrão sobre como misturar o sucedâneo do leite, especificando quantidade, mistura e temperatura de alimentação estava disponível. A pedido, o proprietário declarou que ele estimou a quantidade de sucedâneo do leite e que a temperatura de mistura variava entre frio e calor manual, dependendo da disponibilidade de água quente no galpão. O proprietário declarou que a perda de pêlos tinha ocorrido em bezerros alimentados apenas com leite integral, mas não havia registros disponíveis para revisar o manejo de alimentação dos bezerros afetados. Por alguns meses, bezerros cruzados BB também receberam três doses de 10 ml de uma mistura de vitaminas orais durante os primeiros 3 dias de vida. Na idade de 6 semanas, aos bezerros foram oferecidos feno, grãos e água de livre escolha. Os bezerros foram desmamados por volta dos 3 meses de idade.
Exame de bezerros pré-desmamados
Série de bezerros foram examinados no momento da visita do rebanho. Quatro bezerros mais jovens (três BS, um BB x BS) entre 1 e 10 dias de idade, assim como três bezerros mais velhos (BB x HF, BB x RH, BB x BS) entre 6 e 9 semanas de idade. Todos os bezerros cruzados eram machos; os três bezerros fêmeas de raça pura BS foram destinados a serem novilhas de reposição. Os bezerros mais jovens não apresentaram anormalidades no exame físico, exceto para um bezerro que sofria de diarréia neonatal e febre; não foram detectadas anormalidades na pele e no pêlo. Os três bezerros mais velhos mostraram perda de pêlos ao redor da cabeça, pescoço, cotovelos, ombros e costas (Fig. 4). Em todos os três bezerros, a alopecia e descamação tinham começado por volta das 3 semanas de idade e o pêlo começou a crescer novamente com aproximadamente 6 semanas de idade. Todos os bezerros mais velhos estavam pouco desenvolvidos e apresentavam condição corporal baixa comparados com bezerros BB da mesma idade. Outras descobertas incluíram uma arritmia irregular na auscultação do coração em um bezerro cruzado de nove semanas de idade. A tenda cutânea e posição dos globos oculares não revelaram sinais clinicamente detectáveis de desidratação. Amostras de sangue foram coletadas de todos os bezerros, como descrito acima. Todos os quatro bezerros cruzados BB tinham valores elevados de hematócrito (51-59%; média, 54%; intervalo de referência Clinic for Ruminants, LMU Munich, 30-36%) e contagem de eritrócitos (12,5-14,6 × 1012/L; média, 13,50 × 1012/L; intervalo de referência Clinic for Ruminants, LMU Munich, 5-8 × 1012/L). Os níveis de albumina e proteína total não foram indicativos de desidratação nestes bezerros. Os parâmetros hematológicos e bioquímicos assim como os níveis de minerais traços e atividade de glutationa peroxidase não foram notáveis, com exceção da redução da concentração de proteína total em um bezerro de dois dias de idade (42.40 g/L; intervalo de referência Clinic for Ruminants, LMU Munich, 55-70 g/L), indicando falha na transferência da imunidade passiva.
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Quatro bezerros cruzados Belgas de raça azul na fazenda alojados em baias de box. Imagens tiradas durante a visita do rebanho. a e b: bezerro cruzado BB x HF, 6 semanas de idade, com perda extensa de pêlos ao redor do pescoço, murcha e ao redor dos olhos. b: descamação extensa da pele no pescoço. c e d: bezerro cruzado BB x BS, 9 semanas de idade, com história de alopecia extensa e crescimento fino do pêlo, observe a postura com pernas traseiras reunidas sob o abdômen. d: Cabeça e base da orelha mostrando ligeira descamação e fino crescimento de pêlos. e e e f: BB x BS de bezerro cruzado, 9 semanas de idade, com história de alopecia e fino crescimento de pêlos. f: Garrote e área dos ombros mostrando fino crescimento de pêlos. g: Recém-nascido BB x BS de bezerro cruzado com pêlos intactos
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Exame de animais adultos
Preenchimento de rúmen foi bom a muito bom em quase todos os animais adultos. Catorze dos 27 animais adultos apresentaram deformações das garras devido ao crescimento excessivo e à falta de aparagem das garras e quatro destes 14 apresentaram sinais de manqueira ou feridas decubitais das extremidades. A pontuação de condição corporal (BCS) foi determinada para todos os animais adultos de acordo com Edmonson et al. . Quatro animais em diferentes estágios de lactação tiveram uma BCS de ≤2.5/5.
Amostras de sangue retiradas de seis vacas recém-nascidas foram analisadas e os resultados da hematologia e da química sanguínea não mostraram anormalidades. A concentração de beta-hidroxibutirato estava entre 0,5 e 0,9 mmol/L para estes animais. Seis amostras de urina de animais em lactação foram testadas e os resultados não foram notáveis além de quatro amostras com baixas concentrações de sódio (13,0-16,0 mmol/L; limite de referência Clínica para Ruminantes, LMU Munique, > 20 mmol/L).
Outras investigações
Após consulta com o proprietário e o veterinário do rebanho, outros quatro bezerros cruzados BB entre 1 a 8 dias de vida foram trazidos à clínica para estudar o curso clínico da doença desde o início. Todos os bezerros tinham recebido colostro de suas respectivas mães e receberam leite integral antes de serem levantados. A fim de reproduzir a situação na fazenda, todos os quatro bezerros receberam o mesmo substituto do leite comercial duas vezes ao dia. Água, feno e ração iniciadora de bezerros (grãos) foram oferecidos ad libitum. Eles não receberam nenhum outro tratamento. Todos os bezerros foram examinados clinicamente na chegada e amostras de sangue foram obtidas para análise como descrito acima, incluindo a determinação do conteúdo de vitamina C no soro. A presença ou ausência de queda de pêlos foi documentada diariamente. As características básicas e resultados do exame clínico são apresentados na Tabela 1. Os achados anormais foram limitados a uma arritmia cardíaca irregular em três bezerros (bezerros 4, 5 e 6). A Tabela 2 mostra os resultados da hematologia e química clínica, incluindo o nível de vitamina C no soro. Nenhum dos quatro bezerros desenvolveu as lesões típicas incluindo escamação e queda de pelos enquanto internado na clínica durante os 3 meses seguintes.